Research Articles

2019  |  Vol: 5(6)  |  Issue: 6 (November-December)  |  https://doi.org/10.31024/ajpp.2019.5.6.23
Screening of Black spruce oil for nootropic activity in rats

Vijaykumar P. Rasal, Pawan KharadeRajashaker S. Chavan

Department of Pharmacology, KLE College of Pharmacy, Belagavi, Karnataka, KLE Academy of Higher Education & Research, Belagavi, Karnataka  India.

*Address for Corresponding Author

Pawan   Kharade

KLE  College  of  Pharmacy,  Belagavi,  Karnataka,  KLE  Academy  of  Higher  Education  &  Research,  Belagavi – 590010,  Karnataka,  India.

 

Abstract

Background: Memory failure is most common problem in dementia. The  brain  consists  of  “n”  number  of  synapses  that  allow  signals  to  travel  across  the brain  circuits  and  this  helps  in  creating  cellular  basis  of memories. The  functioning  of  synapses  and  neurons  involved  in  transmission  of  acetylcholine  is  mainly  impaired  in  Alzheimers  Disease. Objective: The  purpose  of  this  study  was  to  explore  the  nootropic  effect  of  Black  spruce  oil  against  scopolamine  induced  amnesia  in  rats. Materials  and  Methods: Training of animals was carried out on  day  fourteen  and  retention  was  tested  on  day  fifteen. The  animals  were  treated  with Mentat (100mg/kg  orally)  and  black spruce oil (100  &  200mg/kg,  orally)  till  day fourteen. Amnesia was induced using scopolamine (3mg/kg i.p.)  on 14th  day  after acquisition  trial. Retention  of  memory  was  tested  on  day  fifteen  using  elevated plus  maze, passive  shock  avoidance  and  morris  water  maze. The animals were sacrificed on 15th day for acetylcholinesterase enzyme estimation. Results: Significant   (P<0.001) improvement  in learning and memory was observed in animals  treated  with  Black  spruce  oil  (200mg/kg)  and also  amnesia  induced  by scopolamine  (3mg/kg s.c)  was  found  to  be  reversed. Levels of Acetyl  cholinesterase  were  found  to  be  reduced significantly (P<0.001)  in comparison with  negative  control group  i.e. animals exposed to scopolamine. Conclusion: The  results  indicate  beneficial effect  of  black  spruce  oil  on  memory function and this might be due  to  inhibition  of  acteylcholinesterase  enzyme  activity.

Keywords: Memory Performance, Alzheimer’s disease, Black spruce oil, Scopalamine, Acetylcholinesterase


Introduction

Dementia  is  often  associated  with  Alzheimer  Disease  (A.D.)  and  leads  to  disturbance  in  learning,  capacity,  memory,  language  and  judgement  without  altering  consciousness.  A.D.  is  neurodegenerative  disorder  characterized  by  formation  of  neurofibrillary  tangles  and  senile  plaques in  certain  areas  of  brain (Saini  et  al.,  2012). People with  A. D. are  also  often  associated  with  symptoms  such  as  depression,  apathy  and  psychosis(Joshi  and  Parle,  2006). Neurobiological studies have revealed that cholinergic system is strongly involved in learning and memory process. Reduced cholinergic neurotransmission results in decline in cognitive function in dementia (Gindi et al., 2011). It  has  been  found  frequently  that  there  is  loss  of  cholinergic  synapse  in  hippocampus  and  neocortex  in  A.D.  patients. To  overcome  this,  there  is  need  to  look  for  agents  that  regulate  AChE  function. AChE  inhibitors  such  as  tacrine,  rivastigmine  and  donepezil  have  been  approved  by  U.S.  Food  and  Drug  Administration  for  improvement  of  symptoms  associated  with  A.D (Obulesu  and  Rao,   2011).  However,  due  to  increased  incidence  of  side-effects  associated  with  allopathic  medicine  (both  nootropic  &  cholinesterase  inhibitors)  it  is  worthwhile  to  look  for  natural  resources  for  management  of  cognitive  disorders. The  importance  of  herbal  drugs  containing  antiradical  constituents  in  preventing  and  treating  oxidative  stress  linked  disease is  considerably  increased (Donya  and  Ibrahim,  2012). Black  spruce  is  a  restoractive. It  has  strengthening  and  stabilizing  effect  on  nervous  system  and  also  supports  adrenal  function. Therefore  may  have  usefulness  in  developing  stamina. Moreover  black  spruce  oil finds  its  use  in  conditions  such  as  aching  joints, muscle  aches  &  pains, strains and  poor  circulation. Since  there  are  no  reports  available  on  the  activity  of  black  spruce  essential  oil  &  based  on  its  traditional  use  the  present  study  is  designed  to  evaluate  cognitive  function (Damian  and  Damian,  1995).

Materials and Methods

Drugs and chemicals

Mentat  formulation  (Himalaya, Drug  Co, Bangalore,  India), scopolamine  (Sigma   Aldrich), black  spruce  oil  (New  Directions  Aromatics,  Canada). Mentat  and  black spruce  oil  were  administered  orally  by  preparing  suspension  with  tween 80. Scopolamine was administered subcutaneously by dissolving in distilled water.

Experimental Animals

Study  was carried  out  using  male  wistar  rats  having  body  weight  between  150-200 g. The animals were bought from Shri. Venkateshwara  Enterprises,  Bangalore and  maintained  under  standard  environmental  conditions  (12  hr  each)  light/dark  cycle.  The  animals  had free  access  to  standard  pellet  and  water  which  was  given  ad  libitum  and  were  allowed  to  get  acclimatized  to  laboratory  conditions  for  minimum  7  days  before  commencement  of  behavioral  experiments. Study design was approved by Institutional Animal Ethics Committee (registration no.  KLECOP/IAEC/Res.20-09/08/2014). Experiment  on  animals  was  carried  out  as  per  Rules  and  regulations  mentioned  under  CPCSEA  guidelines. 

Determination of LD50  

The  acute  oral  toxicity  was  performed  by  using  female  rats  (150-200  g)   as  per  OECD-423  guidelines. Each step was carried out using 3 animals.  Dosing  of animals  was  carried  out  by  selecting   initial  dose  from  fixed  dose  levels  i.e.  5,  50,  300  &  2000  mg/kg  body  weight   p.o. Initial  dose selected  for  dosing  was  300 mg/kg  body  weight  as  per  OECD  recommendations (Talpate  et  al.,  2014).  Black  spruce  oil  did  not  show  any  significant  toxic  signs  of mortality  at  a  large  dose  upto  2000  mg/kg,  therefore  200  and  100  mg/kg  p.o.  were  fixed  as  daily  dose  and  administered  by  making  emulsion  with  tween  80.

Assessment of nootropic activity

Animal protocol

Five groups of male wistar rats  were  made  randomly. Each group comprised of six male wistar rats. Group I (Negative  Control  group)  was  given  normal  saline  (10 ml/kg)  by  oral  route  once  daily  for  14  days, Group  II  (Positive  control)  scopolamine  hydro  bromide  (3  mg/kg)  by  intraperitoneal  route  was  injected  on  14th day,  Group   III  treatment  was  given  by  administering  Mentat  (100  mg/kg)  by  oral  route,  Group IV  received  black spruce oil (100  mg/kg)  by  oral  route  and  Group  V  recieved  black spruce oil  (200 mg/kg)  by  oral  route. Mentat  and  black  spruce  oil  was  administered  for  14  consecutive  days  and  scopolamine (3 mg/kg, i.p.)  was administered  on  14th   day.

Exteroceptive behavioral models

Elevated plus maze

Elevated  plus  maze  served  as  exteroceptive  model  for   evaluating  learning  and  memory. Learning  and  memory  was  evaluated  by means  of procedure  described  by  (Joshi  and  Parle, 2006). The  direction  in  which  individual  rat  was  placed  was  with  its  head  facing  away  from  central  platform  &  transfer  latency  (TL)  i.e. duration  of  time  taken  by  the  rat  to  enter  one  of  the  closed  arms  with   all  its  four  legs  was  noted .90  sec  was  considered  as  upper  cut  off  time. If  the  rat  was  not  able  to  enter  one  of  the  two  covered  arms  within  90  sec  it  was  gently  pushed  into  one  of  the  enclosed  arms  and  transfer latency  was  noted  as  90  sec. The  rats  were  returned  to  their  home  cage  after  allowing  them  to  explore  the  maze  for  10sec. After  24  h  of   the  first  exposure,  TL  was  noted  on  14th    day of  study  for  determining  the  acquisition  keeping  the  cut-off time  of  60  sec. After acquisition trial on 14th   day, scopolamine (3 mg/kg i.p.) was administered. On  fifteenth day,  the  animals  were  subjected  to  the  retention  test  for evaluating  the  transfer  latency  keeping  the  time  period  of  60s  as  cut-off  criterion.

Passive avoidance paradigm

Passive  avoidance  task  was  measured  using  the  method  expressed  by  (Gupta  et  al., 1961).  Animals  were  administered  with  black  spruce  oil  (100  &  200  mg/kg  p.o.) and  mentat  (100  mg/kg  p.o.)  for 14  days. On  14th  day  each  animal  was  placed  in  the  light  compartment  &  the  time  taken  by  the animal  to  enter  into  the  dark  compartment  was  noted  (acquition  latency). Entry  of  animal  in  the  dark  compartment  was  triggred  with  a  shock  of  0.4  mA/2s  onto  the grid  floor . The  animal  was  then  returned  to  its  home  cage  and  exposed  to  scopolamine  (3  mg/kg  i.p.). After a period of 24 hrs retention latency  was  measured. 180  sec  was considered  as  upper  cut  off  time  of  retention.

Morris water maze test

Learning  and  memory  was  assesed  using  morris  water  maze  test  (Gupta  et  al., 2012;  Konathala  et  al., 2014;  Dalla  et  al., 2009). During training  session  each  animal  was  subjected  to  4  consequtive  trials  each  day. The gap between each trial was 5 mins.  The  rat  was  placed  in  water  between  the  quadrants  facing  the  wall  of  pool  &  was   allowed   to  locate  the  hidden  platform  for  120  s. The drop location was changed during each trial. The  rat  was  then  allowed  to  stay  on   to  the  platform  for  20  sec  once  it  found  the  hidden  platform. If  hidden  platform   was  not  tracked  by  the  animal  within  a  time  frame  of  120  s  it  was  directed  towards  the  hidden  platform  and  permitted  to  stay there  for  20  s   and  then  removed  from  morris  water  maze. The  animals  where  dried  &  than  returned  to  their  home  cages. 24  hrs  later  (On  day  15th)  target  quadrant  was  kept  free  of  hidden  platform   &  the  mean  time  spent  by  the   animal  in  4th  quadrant  searching the  hidden  platform  was  noted  as  index  of  retrieval.

Determination of whole brain activity of biological catalyst 

Determination  of  acetyl  cholinesterase  enzyme  activity  was  carried  out  as  per   method  described  by  Ellman  et  al, 1961). The  enzyme  activity  was  calculated  using  the  formula:

R  = ▲A/1.36(104)  ×1/(400/3120)C0

     =  5.74(10-4)▲A/C0

Where,  R  =  n  moles  of  substrate  hydrolysed  at  each  min  per  gm  of  tissue.

 ▲A  =  absorbance  change  during  each  min.

 C =  primary  conc.  of   tissue  (mg/ml).    

Statistical Analysis

The  data was subjected  to  one  -  way  analysis  of  variance (ANOVA)  followed  by  Tukey’s Multiple Comparison  test  &  P< 0.05, 0.01  &  0.001  were  considered  significant.

Results

Acute toxicity study

Black  spruce  oil  did  not  show  any  significant  signs  of  mortality  at  large  dose  upto  2000  mg/kg.

Effect  of  black  spruce  oil  on  transfer  latency  in  EPM  behavioral  model

Positive  control  group  showed   significant  (P  <  0.01;  41.33   ±  4.318)   increase in  TL  on  day  15  as  compared  to  day  14  &  and  as  equated  with  negative  control  group,  reflecting  memory  damage.  In the  treatment  group  the  animals exposed to scopolamine & treated with standard  (Mentat),  showed  retrieval  of  memory  by reducing  the  time  taken  to  perform  the  task  in  EPM.  Those exposed  to  scopolamine  (3mg/kg  i.p)  and  treated  with  black spruce  oil  (200  mg/kg  p.o.)  for  14  days  protected  the  rats from  scopolamine  induced  memory  impairment  as  they  showed  highly significant  (P  <  0.001;  15.00  ±  1.713)  decrease  in transfer  latency   as  equated  with  positive  control  group (Table 1).

Table  1. Black spruce  oil  outcome  on  Transfer  Latency

     Groups

Transfer Latency (in Sec)  in  Elevated  Plus  Maze  Test

Day  14

Day  15

Normal  control

28.33±0.9888

20.33±1.647 

Scopolamine

19.00±0.5578

41.33±4.318##^

Mentat+SCO

30.00±0.7638

11.83±0.8724***^

B.S.O 100mg/kg+SCO

48.50±1.232

18.00±1.265**^^^

B.S.O 200mg/kg+SCO

41.33±10.16

15.00±1.713***^^^

SCO- Scopolamine; B.S.O-  Black  Spruce  Oil. Characterization  of  values  is  done  as  Mean  ±  Standard  Error  of  Mean  (n=6  present  in  every  group ).

###P<0.001, ##P< 0.01, # P< 0.05- Denotes evaluation with  Normal Control

***P<0.001, **P< 0.01, *P< 0.05- Denotes evaluation with  Scopolamine induced

^^^P<0.001,^^P<0.01,^P<0.05- Denotes evaluation between  day  14  &  day 15.

Effect of Black spruce oil on Inhibitory Shock Avoidance

Positive control group i.e. animals exposed to scopolamine (3 mg/kg i.p.)  produced significant  (P<0.05)  decrease  in  STL  on  day  15  as  compared  to  day  14  indicating  loss  of  memory. In  the treatment  group,  the  animals  exposed  to  scopolamine  &  treated  with  Mentat  (100  mg/kg  p.o.)  showed significant  (P<0.001)  activity  by  increasing  the  STL  period. The rats exposed to scopolamine  (3mg/kg  i.p.)  and  treated with  black  spruce  oil( 200  mg/kg  p.o)  produced  significant retrieval  of  memory  as  they  showed  significant  (P<0.001)  increase  in  STL  as  compared  to  positive  control (Figure 1).

Figure 1. Effect  of  Black  spruce  oil  on  Inhibitory  Shock  Avoidance  using  Passive  Avoidance  Paradigm. ###P<0.001, ##P< 0.01, # P< 0.05-Denotes  evaluation  with  Normal Control. ***P<0.001, **P< 0.01, *P< 0.05- Denotes  evaluation  with  Scopolamine induced. ^^^P<0.001,^^P<0.01,^P<0.05- Denotes  evaluation     between  day 14 & day 15.

 

Effect  of  Black  spruce  oil  on  Escape  Latency  Time  (ELT) using  Morris  Water  Maze

Positive  control  group  i.e.  animals  exposed  to scopolamine  (3 mg/kg  i.p)  showed  highly  significant (P<0.001;  20.33±0.8819)  reduction  in  ELT  on  day  15  as  equated  to  day  14  indicating  significant  loss  of memory. In  the  treatment  group,  the  animals  exposed  to scopolamine  &  treated  with  Mentat  (100  mg/kg)  showed  highly  significant  (P<0.001;  69.83±4.578)  activity  by  increasing  escape  latency. The  rats  exposed  to  scopolamine (3mg/kg  i.p)  &  treated  with  black  spruce  oil  (200  mg/kg) produced  significant  (P<0.001;  60.83±2.600)  retrieval  of memory  as  they  showed  significant  increase  in  ELT  as equated  to  positive  control  (Table  2).

Table  2.   Effect  of  Black  spruce  oil  on  Escape Latency  time  (ELT)  in  Morris  Water  Maze  test.

Groups

Escape  Latency  (in  Sec.)  in  Morris  Water  Maze  Test

Day  14

Day  15

Normal  control

55.00±0.9309

69.17±1.682

Scopolamine

52.33±1.8017

20.33±0.8819###^^^

Mentat+SCO

41.50±1.979

69.83±4.578***^^^

B.S.O 100mg/kg+SCO

42.33±1.054

57.50±3.233***^^

B.S.O 200mg/kg+SCO

47.17±2.613

60.83±2.600***^^    

SCO - Scopolamine, B.S.O - Black Spruce Oil. Characterization  of  values  is  done  as  Mean  ±  Standard  Error  of  Mean  (n=6  present  in  every  group). ###P<0.001, ##P< 0.01, # P< 0.05- Denotes evaluation with Normal Control. ***P<0.001, **P< 0.01, *P< 0.05- Denotes  evaluation with  Scopolamine induced. ^^^P<0.001,^^P<0.01,^P<0.05- Denotes  evaluation  between  day  14 &  day  15.

Effect of  Black  spruce  oil  on  Acetylcholinesterase  enzyme activity

Positive  control  group  showed  significant  (P<0.001)  rise  in  Acetylcholinesterase enzyme  activity  as  equated  with  negative  control  group.   Reduction  in  acetylcholinesterase  activity  was  seen  in  animals  treated  with higher  dose  of  black  spruce  oil.  Mentat  being  a  standard  drug  also  reversed  increased AChE  activity (Figure  2).

Figure  2. Effect  of  Black  spruce  oil  on  Acetylcholinesterase  enzyme activity. SCO-Scopolamine, B.S.O - Black Spruce Oil. Characterization  of  values  is  done  as  Mean  ±     Standard  Error  of  Mean  (n=6  present  in  every  group). ###P<0.001, ##P< 0.01, # P< 0.05- Denotes evaluation with Normal Control. ***P<0.001, **P< 0.01, *P< 0.05- Denotes  evaluation  with  Scopolamine induced.

Histopathological studies

In  the  hippocampi  of  disease  control  group  large  number  of  pkynotic  black neurons, meningeal  congestion  and  cerebral  oedema  was  observed  and  this  was  subsequently  found  to  be  reduced  in  treatment  groups  i.e. animals  exposed  to scopolamine  and  treated  with  Mentat  100 mg/kg  p.o.  and  black  spruce  oil  200 mg/kg  p.o.  (Figure 3).

Figure  3.  Histopathology of Hippocampus. (a) Negative Control, (b) Positive control, (c) Mentat + scopolamine, (d) black spruce oil 200mg/kg + scopolamine

 

 

Discussion

A.D.  is  characterized  by  progressive  pathological  changes  in the  brain  which  slowly  erodes  memory  &  thinking  skills, and  eventually  the  ability  to  carry  out  simple  tasks  &  also  results  in  physical  changes  (stiffness,  loss  of  ability  to  walk). The major underlying mechanism involved in A.D.  is  accumulation  of  proteins  such  as  β  amyloid  &  tau  protein  in  certain  areas  of  brain  (hippocampus). Senile  plaques  &  neurofibrillary  tangles  prompt  the  injury  &  death  of  neurons  and  result  in  memory  loss  &  behavioral  changes. Ach  is  the  major  neurotransmitter  involved  in  regulation  of  learning  &  memory. Cholinergic  neurotransmission  in  the  basal  forebrain  area  seems  to  be  the  most  affected  system  in  A.D. Neurochemical changes  involved  in  A.D.  is  reduced  brain  Ach  levels  in hippocampus  & neocortex. Estimation  of  acetylcholinesterase  (AChE)  activity  is  simple  &  valuable  tool  for  assessing  cholinergic  function. Moreover  CNS  disorders  like  A.D.  & Parkinson’s  disease  are  mostly  treated  by  phararmacological  manipulation  of  cholinergic  function (Naidu  et  al.,  2013;  Kalpana,  2004).  Mentat  also  known  as  BR-16A   contains  over  20  different  ingredients. Important  ingredients  of  mentat  propose  to  improve  memory  function, other  ingredients  of  mentat  are  nerve  tonics,  putative  general  tonics  &  vitalizers(Vijay  et  al.,  2012). In  ayurveda, BR-16A  is  reported  to  improve  cognition  &  decrease  deficits  involved  in  organic  brain  states (Andarde et al., 2000). In  the  present  study  scopolamine  produced  amnesia  in  experimental  animals  as  indicated  by  increased  TL, decreased  ELT  &  decrease  in  retrieval  of  memory  in  PSA. Furthermore,  treatment  with  black  spruce  oil  protected  the  animals  from  learning  and  memory  impairment  produced  by  scopolamine (centrally  acting  anti-muscarinic  drug)  as  indicated  by  decreased  TL  increased  ELT  &  increase  retrieval  of  memory  in  PSA. This finding suggest possible neuroprotective role of black spruce oil. Inhibitory  shock  avoidance  model  is  used  for  accessing  memories  that  are  stored  for  lengthy  period  of  time  based  on  negative  reinforcement. The  latency  to  reach  the central  platform  of  elevated  plus  platform  is  indicative  of  learning  ability  of  the  animals. The  animal  is  said  to  have learnt  if  the  latency  to  reach  the  central platform  is  reduced. MWM  employed  in  present  experiment  is  globally  used  model  to  test  spatial  learning  &  memory  in  rodents. In  MWM  increase  in  TSTQ  in  search  of  absent  platform  during day  15  indicates  retrieval  of  memory (Dalla  et  al., 2009). Neurons  involved  in  transmission  of  Ach   are  very  crucial  in  memory  and  learning , and  degeneration  of  cholinergic  neurons  is  primary sign  observed  in  A.D. Depletion  of  cholinergic  functioning  resembles  cognitive  deficits  in  patients.  In  the present  study, black  spruce  oil, showed  significant  elevation  of acetylcholine  levels  by  significant  reduction  of  cholinesterase activity  in  rats  brain  &  ultimately  improved  memory.

Conclusion

Stressful  lifestyle  have  lead  to  rise  in  incidence  of  A.D.  in  middle  age  group  population  along  with  elderly  population. However modern  system  of  medicine  is  yet  to  provide   safer  treatment  for  complete  cure  for  such  disease. Although  many  plants  &  their  extracts  are  being  used  in  animal  studies  &  A.D.  patients  only  few  drugs  are  available  today  for  management  of  A.D. Herbal  medicine  may  prove  to  be  a corner  stone  in  treatment  of  such  outrageous  neurodegenerative  disorder  &  since  herbal  medicines  have  wide  medicinal  activities, higher  safety  margins  &  lesser  costs  they  are  in  great  demand  in  developed  as  well  as  developing  countries  for  primary  healthcare. In  the  present  study  black  spruce  oil  reverses  the  scopolamine  induced  memory  deficit  in  E.P.M, PSA  &  MWM  behavioral  models. It  elevated  the  acetylcholine  level  by  significant  reduction  of  cholinesterase  activity  in  rat  brain  &  hence  improves  memory. Hence, in  the  light  of  above  it  is  worthwhile  to  utilize  black  spruce  oil   in  the  management  of  neurodegenerative  disorders  of  a  type  Alzheimer’s  disease  and  further  clinical  evaluation  is  required to  establish  its  therapeutic  value. 

Conflict of interest

Conflict of interest declared none.

Acknowledgement

Authors gratefully acknowledge K.L.E. College of Pharmacy, Belgaum for providing    necessary research facility.

References

Andarde C, Sudha S, Venkatraman BV. 2000. Herbal  treatments  for  ECS- induced  Memory Deficits:  A  review  of  research  and  a  discussion  on  animal  models. The  Journal of  ECT,  16  (2):  144.

Dalla  Y, Singh  N, Jaggi  AS, Singh  D, Ghulati  P. 2009.  Potential of  ezetimibe  in  memory  deficits  associated  with  dementia  of  Alzheimer’s  type  in  mice. Indian  Journal  of   Pharmacology, 41  (6):  262  -  267.

Damian  P, Damian  K  1995. Aromatherapy  scent  and  psyche. United  States:  Healing  Arts  Press.

Donya  SM, Ibrahim  NH. 2012. Antimutagenic potential of Cynarascolymus, cupressus  semperveirens  and Eugenia  jabolona against  paracetamol  induced  liver  cytotoxicity. Journal  of  American  Science,  8  (1):  61  -  67.

Gindi  S, Chandu  B, Khagga  M, Challa  SR, Dasari  V.  2011. Evaluation  of  nootropic  potential  &  invitro  antioxidant  activity of  aqueous  extract  of  roots  of  Asparagus  Racemosus  in  rats. International Journal of Pharmaceutical Research & Development, 3 (6): 184 - 191.

Gupta  A, Hemraj, Jalhan  S, Jidal  A, Upmanyu  N. 2012. Various animals  models  to  check  learning  and  memory –  A  Review.

International  Journal of  Pharmacy  &  Pharmaceutical  Sciences,  4  (3):  91 - 95.  

Joshi  H, Parle  M. 2006. Zingeber  officinale:  Evaluation  of  its  nootropic  effect  in  mice. African  Journal  of  Traditional,  CAM, 3 (1): 64-74.

Kaplan  W. Priority  medicines  for  europe  and  the  world  a public  health  approach  to  innovation  update  on  2004  background  paper.  [ONLINE]  Available  at:  http://www.who.int/medicines/areas/priority_medicines/BP1_introduction.pdf. [Accessed  01  April  2015]

Konathala  R, Kumar  KP, Kotaiah  S, Annapurna A. 2014. Studies  on  nootropic  activity  of  Rutin  and  Naringin  on scopolamine  induced  amnesia  in  rats  using  morris  water  maze task. World  Journal  of  Pharmacy  &  Pharmaceutical  Sciences, 3  (7):  70  -  76.

Naidu  NR, Bhat  A, Dsouza  U. 2013. Evaluation  of  the  possible protective  and  therapeutic  influence  of  Evolvulous  Alsinoides on  Learning  and  Memory  against  A.D  induced  by  aluminium  chloride  in  rats. International  Journal  of  Pharmaceutical  and  Biological  Sciences  Research  &  Development, 1  (4):  13-25.

Obulesu  M, Rao  DM. 2011. Effect  of  plant  extracts  on Alzheimer’s  disease:  An  insight  into  therapeutic  avenues. Journal  of  Neurosciences  in  Rural  Practice,  2  (1):  56  -  61.

Saini  D, Dingara  AK, Chopra  B, Parle  M. 2012. Evaluation  of  nootropic  activity  of  Trigonella   foenum  leaves  in  mice. International  Journal  of  Pharmacy  and  Pharmaceutical  Sciences,  4  (4):  136  -  143.

Talpate K, Bhosale  UA, Zambare  MR, Somani  RS. 2014. Neuroprotective and nootropic activity of Clitorea ternatea Linn.  (Fabaceae)  leaves on diabetes induced cognitive decline in experimental animals. Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, 6 (1): 48-55.

Vijay  N, Tilak  AV, Dewda  PR, Komma  R, Tilak  MA, More   B. 2012. Modulation  of  working  memory  by  mentat  &  donepezil using  scopolamine  induced  amnesia  in  rats. American Journal of Pharmtech Research, 2 (2): 311 - 319.

Manuscript Management System
Submit Article Subscribe Most Popular Articles Join as Reviewer Email Alerts Open Access
Our Another Journal
Another Journal
Call for Paper in Special Issue on

Call for Paper in Special Issue on